Se desarrolló una modificación del método sensible de difusión en agar para la determinación de alfa-amilasa a macroescala. Las modificaciones propuestas reducen los costos al utilizar almidón como sustrato y agar como medio de soporte. Por lo tanto, se construyó una curva estándar utilizando una solución de alfa-amilasa de Aspergillus oryzae, con concentraciones que oscilaban entre 2,4 y 7500 U.mL⁻¹. Se midieron zonas de difusión radiales claras tras 4 horas de incubación a 20 °C. Se obtuvo una relación lineal entre el logaritmo de las actividades enzimáticas y el área de las zonas claras. El método se validó mediante el análisis de α-amilasa de cebada en concentraciones de 2,4; 60; 300 y 1500 U.mL⁻¹. El método propuesto resultó ser más simple, más rápido, menos costoso y capaz de determinar la α-amilasa a macroescala en un amplio rango (2,4 a 7500 U.mL–1) en la investigación científica, así como en actividades de laboratorio de enseñanza.