El uso de suplementos alimenticios naturales es una herramienta alternativa para disminuir el daño causado por ciertas bacterias, mejorando la salud y productividad animal. La presente investigación tuvo como objetivo investigar el efecto proinflamatorio de la flagelina liberada del flagelo bacteriano del serovar Typhimurium y atenuar la inflamación inducida con luteolina como un flavonoide de origen vegetal en un co-cultivo de hepatocitos primarios de pollo y células no parenquimatosas. Las células se cultivaron en un medio suplementado con 250 ng/mL de flagelina y 4 o 16 ug/mL de luteolina durante 24 h. Se determinaron la actividad metabólica celular, la actividad de la lactato deshidrogenasa (LDH), las concentraciones de interleucina-6, 8, 10 (IL-6, IL-8, IL-10), interferón-alfa (IFN-alfa, IFN-), peróxido de hidrógeno (HO) y malondialdehído (MDA). La flagelina aumentó significativamente la concentración de la citoquina proinflamatoria IL-8 y la relación de IFN-/IL-10, mientras que disminuyó el nivel de IL-10, lo que indica que el modelo fue adecuado para estudiar la inflamación in vitro. El tratamiento con luteolina a 4 ug/mL no resultó ser citotóxico, como se refleja en la actividad metabólica y la actividad extracelular de LDH, y redujo significativamente la liberación de IL-8 desencadenada por la flagelina de las células cultivadas. Además, tuvo un efecto disminuyente sobre la concentración de IFN-alfa, HO y MDA y restauró el nivel de IL-10 y la relación de IFN-/IL-10 cuando se aplicó en combinación con flagelina. Estos resultados sugieren que la luteolina a concentraciones más bajas puede proteger a las células hepáticas de una respuesta inflamatoria excesiva y actuar como un antioxidante para atenuar el daño oxidativo.