En este estudio, investigamos los efectos del lentinano (LNT) en los parámetros hematológicos, índices inmunológicos y niveles de metabolitos en vacas lecheras. Asignamos aleatoriamente cuarenta vacas Holstein a cuatro grupos de tratamiento. Los tratamientos consistieron en 0, 5, 10 y 15 g/d de LNT. En comparación con el grupo de control, la adición de 10 g/d de LNT disminuyó el contenido de ALT e IL-8, pero al mismo tiempo aumentó el contenido de IL-4 en el suero de las vacas. La suplementación con 10 g/d de LNT disminuyó los niveles de linfocitos, RDW, ALT, AST, TC, IL-2 e IL-8, pero, al mismo tiempo, aumentó los niveles de granulocitos e IL-4 en su suero. Además, la suplementación con 15 g/d de LNT disminuyó los niveles de RDW, TC, IL-2 e IL-8, pero, al mismo tiempo, aumentó los niveles de IL-4 e IgM en su suero. Para el análisis metabolómico, se seleccionaron vacas alimentadas con 0 y 10 g/d de LNT. Los resultados mostraron que 10 metabolitos, incluyendo ribósido de nicotinamida reducido y trehalosa, estaban regulados al alza en el grupo de 10 g/d. Estos metabolitos diferenciales se enriquecieron en el metabolismo de la tirosina y la degradación de la trehalosa y alteraron dos vías metabólicas de biosíntesis de ubiquinona y otros quinones terpénicos, así como el metabolismo del almidón y la sacarosa. Estos hallazgos proporcionan evidencia de que el LNT podría ser utilizado para reducir el riesgo de inflamación en vacas lecheras.