El uso de suero bovino fetal (FBS) en medicina regenerativa plantea serias preocupaciones éticas y científicas. Hemos cultivado y diferenciado las células madre mesenquimatosas caninas (cMSCs) en cinco combinaciones diferentes de lisado plaquetario autólogo (A-PL) y FBS; que consisten en 0% A-PL y 10% FBS (M-1), 2.5% A-PL y 7.5% FBS (M-2), 5% A-PL y 5% FBS (M-3), 7.5% A-PL y 2.5% FBS (M-4), y 10% A-PL y 0% FBS (M-5). Las cMSCs fueron evaluadas por su tiempo de duplicación, eficiencia de diferenciación y expresión de CD73, CD90, CD105 y PDGFRalpha. La expresión de ARNm de también fue evaluada. Los resultados indicaron diferencias no significativas en la proliferación/viabilidad celular; expresión positiva de marcadores de superficie y PDGFRalpha con una diferenciación adipo/osteogénica sustancial. La expresión de genes adipogénicos y osteogénicos fue mayor ( < 0.05) en el grupo M5. En conclusión, el A-PL en el cultivo de cMSCs no afectó negativamente la proliferación y viabilidad celular, sino que también mejoró su potencial genético para la diferenciación multinivel. Nuestros resultados indican que el A-PL puede ser utilizado como una alternativa al FBS para desarrollar cMSCs potentes bajo un protocolo de buenas prácticas de manufactura para la medicina regenerativa.