Los mulos sementales se han utilizado como équidos de trabajo en varios países. La agresividad bajo la influencia de la testosterona resulta en la necesidad de castración quirúrgica antes del entrenamiento laboral. La vacuna de la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) puede ser un método alternativo para la inmunocastración en mulos. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la vacuna de GnRH sobre la concentración de anticuerpos anti-GnRH, la concentración de testosterona en suero, los efectos adversos clínicos y los cambios de comportamiento en respuesta a la manipulación física seleccionada por humanos. Veinticinco mulos se separaron en tres grupos: Control-intacto, Control-castrado y Tratamiento. El grupo de Tratamiento se dividió además según la condición (intacto o criptórquido unilateral) y la edad. El grupo de Tratamiento recibió 195 ug de la vacuna de GnRH por vía intramuscular en las semanas 0, 4 y 8. Las concentraciones de anticuerpos anti-GnRH aumentaron en las semanas 6 y 10, y luego disminuyeron gradualmente a la línea base en la semana 24. El grupo Tratamiento-intacto-joven tuvo la mayor concentración de anticuerpos anti-GnRH. Las concentraciones de testosterona en suero en el grupo de Tratamiento fueron más bajas que antes de la vacunación desde las semanas 6 a 14. Se detectó edema subcutáneo adyacente al sitio de inyección en el grupo Tratamiento-intacto después de la vacunación de refuerzo. En conclusión, los mulos respondieron a la vacuna de GnRH, que podría suprimir temporalmente la testosterona durante hasta 14 semanas.