Veinte años después de su primera derivación, los cardiomiocitos derivados de células madre pluripotentes humanas (hPSC-CMs) han mostrado promesas en la investigación de modelado de enfermedades, mientras se investiga su potencial para la reparación cardíaca. Sin embargo, la baja eficiencia de transfección es una barrera para una mayor realización del potencial que este sistema modelo tiene para ofrecer. Nos esforzamos por producir un protocolo para mejorar la transfección de hPSC-CMs utilizando el reactivo Viafect de Promega. A través de la optimización de cuatro parámetros esenciales: (i) suplementación de suero, (ii) tiempo entre el replanteo y la transfección, (iii) relación de reactivo a ADN y (iv) densidad celular, pudimos transfectar con éxito hPSC-CMs a eficiencias de ~95%. Los hPSC-CMs transfecados mantuvieron una alta pureza e integridad estructural a pesar de una leve reducción en la viabilidad, y conservaron la compatibilidad con ensayos de fenotipado de hipertrofia. Este protocolo agrega gran valor al campo al superar las limitadas eficiencias de transfección de hPSC-CMs de una manera simple y rápida que garantiza la expresión sostenida de genes transfecados durante al menos 14 días, abriendo nuevas oportunidades en el descubrimiento mecanicista para enfermedades relacionadas con el corazón.