Los sustratos de fibra de madera se utilizan ampliamente como sustitutos de turba en horticultura, pero el impacto de su alta relación carbono-nitrógeno en la inmovilización de nitrógeno y el rendimiento fotosintético de los cultivos sigue siendo incierto. Este estudio examinó sistemáticamente los efectos de los sustratos de fibra de madera en el rendimiento fotosintético de la lechuga y los mecanismos fisiológicos subyacentes utilizando experimentos en macetas. Se combinaron dos tratamientos de sustrato: turba (control) y fibra de madera, con tres niveles de nitrógeno: bajo, medio y alto (63, 127 y 210 mg N·L). Los resultados indicaron que los sustratos de fibra de madera redujeron significativamente la disponibilidad de nitrógeno de acción rápida, lo que llevó a una disminución sustancial en la biomasa de la lechuga (39.0-56.8%), el contenido total de nitrógeno (7.2-39.9%) y el contenido de clorofila (13.7-36.2%). El análisis de la cinética de fluorescencia de clorofila reveló que los sustratos de fibra de madera afectan la función del fotosistema a través de múltiples vías. En la etapa temprana (15 días), los efectos clave incluyeron daño estructural en el lado donante del PSII (Fotosistema II), indicado por los picos L y K, y la inhibición de la transferencia de electrones en el lado aceptador del PSI (Fotosistema I) (Ro disminuyó en un 15.08-27.90%, junto con una reducción en la amplitud W). Los hallazgos proporcionan una base teórica importante para optimizar las estrategias de gestión de nitrógeno para sustratos de fibra de madera.