Midline2 (MID2/TRIM1) es un miembro de la familia de motivos tripartitos (TRIM), que está involucrada en una amplia gama de procesos celulares. Sin embargo, aún faltan estudios fundamentales sobre MID2 porcino (pMID2). En este estudio, identificamos y caracterizamos el gen MID2 completo del cerdo. Los resultados del análisis de alineación de secuencias mostraron que pMID2 tenía un dominio de dedo de zinc RING en el extremo N-terminal, un dominio BBC y un box COS, un motivo FN3 y un dominio PRY-SPRY que eran conservados y similares a los de otros vertebrados. Además, pMID2 tenía los niveles de expresión más altos en el pulmón y el bazo porcinos. La eliminación en serie y la mutagénesis dirigida por sitio mostraron que el sitio de unión del factor nuclear-B (NF-B) podría ser un factor de transcripción esencial para regular la expresión transcripcional de pMID2. Además, el ensayo de inmunofluorescencia indicó que pMID2 se presentaba en la membrana celular y el citoplasma. Para estudiar más a fondo las funciones de pMID2, identificamos y determinamos su capacidad potencial para percibir la estimulación de polial (I:C) e IFN-alfa. Los experimentos de estimulación mostraron que pMID2 mejoraba la vía de señalización JAK-STAT inducida por polial (I:C)/IFN-alfa, lo que indica que pMID2 podría participar en las respuestas inmunitarias. En conclusión, analizamos de manera sistemática y completa las caracterizaciones y funciones de pMID2, lo que proporciona información valiosa para explorar las funciones de pMID2 en la inmunidad innata. Nuestros hallazgos no solo enriquecen el conocimiento actual de MID2 en la regulación de la señalización de IFN, sino que también ofrecen la base para futuras investigaciones sobre el gen MID2 porcino.