El efecto de la esteatosis hepática en el metabolismo de los fármacos ha sido investigado tanto en entornos preclínicos como clínicos, pero los hallazgos de estos estudios siguen siendo controvertidos. Aquí evaluamos el perfil farmacocinético del principal metabolito de sofosbuvir, GS-331007, en animales sanos y ratas con enfermedad hepática grasa no alcohólica (EHGNA) tras la administración oral de una única dosis de 400 mg/kg de sofosbuvir. La concentración plasmática de GS-331007 fue evaluada por HPLC-MS. La expresión de las dos enzimas uridina monofosfato-citidina monofosfato quinasa 1 (UMP-CMPK1) y quinasa de difosfato de nucleósido (ND-PK), responsables de la formación del metabolito activo GS-331007-TP, se midió por qRT-PCR y Western Blot. Demostramos que en ratas con esteatosis, el área bajo la curva de concentración plasmática frente al tiempo (AUC) y la concentración plasmática máxima (C) de GS-331007 aumentaron significativamente, mientras que la expresión de UMP-CMPK fue significativamente menor que la de los animales sanos. La reducción de la expresión de UMP-CMPK sugiere un deterioro de la activación de sofosbuvir a GS-331007-TP, lo que proporciona una posible explicación para la reducción de la eficacia de sofosbuvir en pacientes afectados por el virus de la hepatitis C (VHC) genotipo 3, que a menudo se asocia con la esteatosis hepática. Además, dado que la concentración plasmática de GS-331007 se altera por la esteatosis, se puede sugerir que la concentración plasmática de este metabolito puede no ser un indicador fiable para el análisis de exposición-respuesta en pacientes con EHGNA.