El contenido de nitrógeno en la orina juega un papel crucial en la evaluación del impacto ambiental de la ganadería lechera. Las acidificaciones de la orina evitan la volatilización del nitrógeno, pero pueden llevar a una degradación de la creatinina, el marcador más confiable para cuantificar el volumen total de excreción urinaria, afectando su medición. Este estudio tuvo como objetivo evaluar cómo la acidificación de muestras de orina afecta la concentración y detección de creatinina en ganado lechero. En este ensayo, se tomaron muestras individuales de orina de 20 vacas lecheras Holstein en lactancia, que se dividieron en tres subsamples, asignadas a 1 de 3 grupos compuestos por 20 muestras cada uno. Las muestras fueron tratadas de inmediato de la siguiente manera: acidificación con HSO (1 mL de ácido en 30 mL de muestra) para lograr un pH < 2 (Grupo 1); adición de un volumen igual de agua destilada (1 mL de agua destilada en 30 mL de muestra) para investigar los efectos de dilución (Grupo 2); o almacenamiento sin ningún tratamiento ácido o de agua (Grupo 3). Se llevó a cabo un análisis de los niveles de creatinina utilizando el método de Jaffe. Se empleó la prueba de Friedman para comparar los grupos de orina entre tratamientos, y se utilizó la prueba de Bland-Altman para evaluar el acuerdo entre las mediciones en el Grupo 1 y el Grupo 3. Los valores de creatinina urinaria fueron estadísticamente diferentes (< 0.001) entre el Grupo 1 (mediana 48.5 mg/dL; rango 36.9-83 mg/dL), Grupo 2 (mediana 47.5 mg/dL; rango 36.5-80.7 mg/dL) y Grupo 3 (mediana 48.9 mg/dL; rango 37.2-84). El análisis de Bland-Altman demuestra acuerdo entre el Grupo 3 y el Grupo 1. La medición de creatinina urinaria utilizando el método de Jaffe se ve afectada por la acidificación de la muestra, pero el uso de creatinina como marcador para la producción total de orina podría seguir siendo una herramienta viable cuando las muestras de orina están acidificadas.