El aceite esencial de anís se investiga intensamente en todo el mundo por sus propiedades beneficiosas, debido a la estructura específica de los compuestos bioactivos. Este estudio caracterizó la estructura del aceite esencial y evaluó sus propiedades antimicrobianas. Se realizó una evaluación de la actividad antibacteriana y antifúngica en cepas de (ATCC 25922), (ATCC 27853), (ATCC 25923), (ATCC 19615) y levadura (ATCC 10231). Se utilizó cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG/EM) para la identificación de la estructura, y se aplicó la pérdida de masa por densidad óptica para el análisis de diferentes diluciones de la actividad antimicrobiana de los aceites esenciales de anís. Se identificaron un total de 13 compuestos, de los cuales el trans-anetol estaba en la mayor proporción (72.49%), seguido de limoneno (10.01%), anisole (5%) y alfa-pineno (3.26%). Los resultados obtenidos y analizados estadísticamente, utilizando ANOVA de una vía con la prueba de comparación múltiple de Bonferroni, indicaron la actividad antimicrobiana (< 0.001) del aceite esencial de anís. El aceite esencial de anís es un fitomedicamento prometedor con importante actividad antimicrobiana contra patógenos tanto Gram-positivos como Gram-negativos. Se encontraron altos porcentajes de inhibición para las cepas, pero también se determinó una excelente actividad antifúngica contra.