El cultivo de cereza dulce (L.) en China abarca una superficie estimada de 25,600 hectáreas, lo que representa más de un tercio del total mundial. Las enfermedades virales representan un desafío serio para la producción de cerezas en todo el mundo; sin embargo, el estado fitosanitario de la cereza dulce en China ha permanecido poco comprendido. En este estudio, se recolectaron 191 muestras de cereza dulce de las principales regiones productoras y se analizaron utilizando RT-PCR combinada con secuenciación de ADN para detectar la presencia de 14 virus previamente reportados en China. Los resultados revelaron que el 80.1% de las muestras analizadas estaban infectadas con al menos un virus, con infecciones mixtas detectadas en el 51.3% de las muestras. Los virus prevalentes incluyeron el virus A de la cereza (CVA, 53.4%), el virus de anillo necrótico del ciruelo (PNRSV, 35.1%), el virus de moteado verde de la cereza (CGRMV, 32.5%), el virus asociado a la necrosis del corteza del ciruelo (PBNSPaV, 31.4%) y el virus enano del ciruelo (PDV, 10.5%). El virus de moteado necrótico y oxidado de la cereza (CNRMV) se encontró en una frecuencia muy baja (0.5%), y los otros ocho virus no fueron detectados en ninguna muestra. Con base en estos hallazgos, desarrollamos ensayos de RT-PCR multiplex para la detección simultánea de CVA, PNRSV, CGRMV, PBNSPaV y PDV. Se establecieron con éxito varios sistemas de RT-PCR dual y triplex, incluyendo combinaciones como PBNSPaV/PNRSV, CVA/PDV, CVA/CGRMV, PBNSPaV/PDV/CGRMV y PBNSPaV/PNRSV/PDV. Este estudio identifica a CVA, PNRSV, CGRMV, PBNSPaV y PDV como los virus prevalentes en los huertos de cereza dulce chinos investigados. En consecuencia, se desarrollaron ensayos de RT-PCR multiplex para su detección simultánea. Nuestro trabajo avanza en la comprensión de las enfermedades virales de la cereza dulce en China y proporciona una herramienta complementaria valiosa para el kit de diagnóstico existente.