Desde la época de Hipócrates en el siglo IV a.C., la investigación con animales ha sido utilizada extensamente para diversos propósitos hasta el día de hoy. Sin embargo, el uso de animales para la investigación también ha sido controvertido durante mucho tiempo. Informamos los hallazgos de una encuesta pública basada en un cuestionario en línea diseñado para evaluar las opiniones de una muestra de la sociedad española respecto a la investigación con animales. Se obtuvieron datos demográficos y opiniones de 806 encuestados. Los resultados indicaron un alto nivel de aceptación de la investigación con animales (73.1%). Sin embargo, ciertos factores, como completar el cuestionario inmediatamente después de leer un informe negativo en los medios (OR = 2.41; 95%CI: 1.64-3.54; < 0.001), ser mujer (OR = 1.77; 95%CI: 1.24-2.53; = 0.002) o tener un trasfondo no científico (OR = 2.47; 95%CI: 1.76-3.47; < 0.001), estaban asociados con una tendencia hacia una opinión más negativa. Las opiniones parecían estar influenciadas por el género, el nivel educativo y por incidentes de protesta reportados en los medios. Nuestros resultados también indican que mucha información sobre el bienestar animal, como los protocolos de cuidado y manejo, junto con la legislación, era desconocida para los individuos. Además, una creciente popularidad de las especies de compañía y la oposición a la experimentación animal para fines no biomédicos se reflejaron en las respuestas obtenidas. El uso de animales para fines de investigación surgió como un tema social sensible en términos de preocupaciones sobre la ética y el bienestar animal.