Internalización de Vesículas Extracelulares Ingenierizadas con RGD por Células de Glioblastoma
Autores: Geys, Dovydas; Kazlauskas, Arnas; Geyt, Emilija; Pauien, Neringa; Kulakauskien, Deimant; Lukminait, Indr; Jekabsone, Aist
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2022
Acceso abierto
Artículo científico
2022
Internalización de Vesículas Extracelulares Ingenierizadas con RGD por Células de Glioblastoma
Categoría
Ciencias Naturales y Subdisciplinas
Subcategoría
Biología
Palabras clave
Glioblastoma multiforme
Vesículas extracelulares
Integrina
RGD
Doxorrubicina
SiARN
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 17
Citaciones: Sin citaciones
El glioblastoma multiforme (GBM) es el tumor del sistema nervioso central más agresivo y no tiene un tratamiento eficiente, en parte debido a la retención de fármacos anticancerígenos por la barrera hematoencefálica (BHE) y su concentración insuficiente en las células tumorales. Los vesículos extracelulares (EVs) son transportadores de fármacos atractivos debido a su biocompatibilidad y capacidad para cruzar la BHE. Se puede lograr una eficiencia adicional añadiendo ligandos específicos para las células de GBM. Las células de GBM sobreexpresan integrinas; por lo tanto, una de las estrategias de direccionamiento más sencillas es modificar los EVs con moléculas que reconozcan integrinas. Este estudio investigó el potencial terapéutico de los EVs genéticamente modificados con niveles elevados de péptido de unión a integrina RGD (RGD-EVs) contra células de GBM in vitro. Para la producción de RGD-EV, se generaron células RGD-HEK 293FT estables utilizando un vector de expresión pcDNA4/TO-Lamp2b-iRGD-HA y realizando una selección basada en antibióticos. Los RGD-EVs se aislaron del medio condicionado de células RGD-HEK 293FT y se caracterizaron por tamaño (Zetasizer), marcadores específicos (ELISA) y expresión de RGD (Western Blot). La internalización por células humanas de GBM HROG36 y U87 MG y fibroblastos humanos BJ-5ta se evaluó mediante el etiquetado de ARN de EV fluorescente. El efecto de los RGD-EVs cargados con doxorubicina sobre las células de GBM se evaluó mediante el ensayo de viabilidad metabólica PrestoBlue; la reducción funcional del gen GAPDH mediante siRNA encapsulado en RGD-EV se determinó por RT-qPCR. Los RGD-EVs tuvieron una acumulación un 40% mayor en células de GBM (pero no en fibroblastos) e indujeron una toxicidad significativamente más fuerte por la doxorubicina cargada y el silenciamiento de GAPDH por el siRNA cargado en comparación con los EVs no modificados. Por lo tanto, la modificación RGD aumenta sustancialmente la capacidad de entrega específica de los EVs derivados de HEK 293FT a las células de GBM.
Descripción
El glioblastoma multiforme (GBM) es el tumor del sistema nervioso central más agresivo y no tiene un tratamiento eficiente, en parte debido a la retención de fármacos anticancerígenos por la barrera hematoencefálica (BHE) y su concentración insuficiente en las células tumorales. Los vesículos extracelulares (EVs) son transportadores de fármacos atractivos debido a su biocompatibilidad y capacidad para cruzar la BHE. Se puede lograr una eficiencia adicional añadiendo ligandos específicos para las células de GBM. Las células de GBM sobreexpresan integrinas; por lo tanto, una de las estrategias de direccionamiento más sencillas es modificar los EVs con moléculas que reconozcan integrinas. Este estudio investigó el potencial terapéutico de los EVs genéticamente modificados con niveles elevados de péptido de unión a integrina RGD (RGD-EVs) contra células de GBM in vitro. Para la producción de RGD-EV, se generaron células RGD-HEK 293FT estables utilizando un vector de expresión pcDNA4/TO-Lamp2b-iRGD-HA y realizando una selección basada en antibióticos. Los RGD-EVs se aislaron del medio condicionado de células RGD-HEK 293FT y se caracterizaron por tamaño (Zetasizer), marcadores específicos (ELISA) y expresión de RGD (Western Blot). La internalización por células humanas de GBM HROG36 y U87 MG y fibroblastos humanos BJ-5ta se evaluó mediante el etiquetado de ARN de EV fluorescente. El efecto de los RGD-EVs cargados con doxorubicina sobre las células de GBM se evaluó mediante el ensayo de viabilidad metabólica PrestoBlue; la reducción funcional del gen GAPDH mediante siRNA encapsulado en RGD-EV se determinó por RT-qPCR. Los RGD-EVs tuvieron una acumulación un 40% mayor en células de GBM (pero no en fibroblastos) e indujeron una toxicidad significativamente más fuerte por la doxorubicina cargada y el silenciamiento de GAPDH por el siRNA cargado en comparación con los EVs no modificados. Por lo tanto, la modificación RGD aumenta sustancialmente la capacidad de entrega específica de los EVs derivados de HEK 293FT a las células de GBM.