Los cultivos de granos perennes intercalados con leguminosas se espera que utilicen eficientemente los recursos de nitrógeno (N). Un experimento en macetas utilizando el método de dilución de isótopos de N demostró la competencia interespecífica y el uso de N del suelo y la fijación de N en la hierba de trigo intermedia (IWG) y el trébol blanco (WC) en cultivos intercalados a cinco frecuencias relativas de especies y cuatro niveles de fertilizante de N inorgánico en un diseño de serie de reemplazo. La proporción de N en WC derivada de la atmósfera aumentó del 39.7% en un cultivo único al 70.9% cuando se intercaló con IWG, y el 10.1% de N en IWG se transfirió de WC. La hierba de trigo intermedia mostró una alta aptitud con una alta producción total de materia seca mantenida a bajas frecuencias relativas. La disminución de la frecuencia relativa de IWG solo aumentó la materia seca y la acumulación de N de WC, lo que resultó en una mayor cantidad de N fijado. Los niveles aumentados de fertilización de N aumentaron la proporción de N adquirido del fertilizante en IWG y WC pero disminuyeron el N fijado por WC y el N absorbido por IWG del suelo. Nuestro estudio indica que WC suministra N fijado suficiente para los rendimientos de biomasa de cultivos intercalados de IWG bajo niveles apropiados de fertilidad de N en el suelo y frecuencias relativas de especies.