Las hormonas juveniles (JHs) juegan un papel crucial en el desarrollo del gusano cogollero, con diferentes tipos y concentraciones observadas en diferentes etapas. Sin embargo, la interacción entre las JHs y la 20-hidroxiecdisona (20E) en la coordinación del ciclo de vida del gusano permanece desconocida. En este estudio, mediante el uso de UPLC-MS/MS de alta precisión y qRT-PCR, detectamos cambios en los niveles de JH y 20E e identificamos importantes genes receptores y de respuesta de 20E. Nuestros hallazgos revelaron que JH I antagoniza a JH II, mientras que JH II promueve la síntesis de JH III. Altas concentraciones de JH I y JH II en la etapa larval afectaron fuertemente la muda al siguiente estadio. Además, estas hormonas inhiben la síntesis de 20E y reducen la expresión de sus receptores, afectando así la señalización de 20E. Durante la pupación, JH II desempeña un papel crucial en estimular la síntesis de 20E para la transformación larval-pupal. JH I y JH II son esenciales para la eclosión, controlando con precisión el momento de emergencia y la posterior maduración de los órganos reproductivos. Estas hormonas probablemente regulan el desarrollo larval, la pupación y la reproducción adulta en . Se requieren estudios adicionales para explorar las ventajas regulatorias de JH I y JH II sobre JH III.