Las vías de señalización mediadas por calcio son conocidas por desempeñar roles importantes en el crecimiento polar de los tubos polínicos. Se ha demostrado que la quinasa dependiente de calcio, PiCDPK1, está involucrada en la regulación de este proceso a través de la interacción con un inhibidor de disociación de guanina, PiRhoGDI1. Para comprender más plenamente el papel de PiCDPK1 en la extensión del tubo polínico, diseñamos un estudio de pull-down para identificar sustratos adicionales de esta quinasa. Estos experimentos identificaron 123 interacciones putativas. Se predijo que dos de las proteínas identificadas interactuaban directamente con PiCDPK1, y esta posibilidad se investigó en planta. La primera, NtGF14, una proteína similar a 14-3-3, no produjo un fenotipo notable cuando se sobreexpresó en polen solo, pero rescató parcialmente el fenotipo de tubo esférico causado por la sobreexpresión de PiCDPK1 cuando se sobreexpresó junto con la quinasa. La segunda, NtREN1, una proteína activadora de GTPasa (GAP), inhibió severamente la germinación del tubo polínico cuando se sobreexpresó, y su co-sobreexpresión con PiCDPK1 no afectó sustancialmente este fenotipo. Estos resultados sugieren una interacción in vivo novedosa entre NtGF14 y PiCDPK1, pero no apoyan la interacción directa entre PiCDPK1 y NtREN1. Demostramos la utilidad de la metodología utilizada para identificar interacciones potenciales de proteínas mientras confirmamos la necesidad de estudios adicionales para validar su validez. Finalmente, se encontró apoyo adicional para la intersección entre las vías de PiCDPK1 y RopGTPasa para controlar el crecimiento polar en la punta del tubo polínico.