El objetivo de este estudio fue investigar los efectos de inocular dos cepas productoras de bacteriocinas, ATCC14917 y LP1-4, en el ensilaje sobre las características de fermentación ruminal in vitro y la producción de metano del silo de alfalfa con dos contenidos de materia seca (MS). Antes del ensilaje, la alfalfa fresca se marchitó a un contenido moderado de MS (355 g/kg) y a un contenido alto de MS (428 g/kg). La alfalfa marchita fue tratada con (1) agua destilada (control), (2) la cepa comercial MTD/1 (MTD/1), (3) la cepa productora de bacteriocinas ATCC14917 (ATCC14917) y (4) una sustancia similar a bacteriocinas producida por LP1-4 (LP1-4) a 1 x 10 unidades formadoras de colonias (UFC)/g de peso fresco. Después de 90 días de ensilaje, los silos se utilizaron para la fermentación ruminal in vitro. La inoculación con las dos cepas productoras de bacteriocinas durante el ensilaje redujo notablemente (< 0.05) la producción de CH ruminal in vitro y mejoró la digestibilidad de la MS en comparación con el grupo control, independientemente del contenido de MS. Para los silos con alto contenido de MS, la inoculación con las cepas productoras de bacteriocinas incluso aumentó (< 0.05) la producción total de ácidos grasos volátiles ruminales in vitro. Por lo tanto, los inoculantes productores de bacteriocinas tienen un gran potencial para mitigar la emisión de metano ruminal, pero sin un efecto adverso en la fermentación ruminal del silo de alfalfa inoculado.