La castración es una práctica prevalente e indispensable en la cría de ovejas, que ayuda a mejorar la calidad de la carne, mitigar el comportamiento agresivo y gestionar la reproducción no deseada. Sin embargo, el procedimiento convencional de castración quirúrgica presenta varios desafíos, incluidos el aumento del estrés y el dolor, los efectos perjudiciales sobre el bienestar animal y la disminución de la eficacia económica en las operaciones agrícolas. En consecuencia, los métodos de inmunocastración, que sirven como sustitutos de la castración quirúrgica, están encontrando progresivamente aplicación en el ganado. El rumen, un órgano digestivo y absorbente esencial y distintivo en los rumiantes, se ha asociado con una mejor calidad de la carne y un rendimiento productivo tras la castración en investigaciones anteriores, aunque se han realizado menos estudios sobre los posibles impactos de la inmunización con GnRH en el medio interno del rumen en ovejas después de la desescalada. Por lo tanto, el presente estudio se centró en evaluar el impacto de la inmunocastración con GnRH en el microbioma y metabolómica del rumen en ovejas machos Xizang. Esto se logró mediante el establecimiento de un modelo animal de inmunocastración con GnRH y la recolección de líquido ruminal para investigaciones microbiológicas y metabolómicas integrales. Los resultados de esta investigación revelaron que el impacto de la inmunocastración con GnRH en el aumento de peso corporal fue más pronunciado durante la consecución del objetivo de castración. Además, la proporción en el grupo de machos inmunes (IM) superó a la del grupo de control (EM), lo que sugiere que la inmunodeficiencia de GnRH puede mejorar la digestión y absorción de alimento en las ovejas machos Xizang. A nivel taxonómico, la presencia elevada de ciertas bacterias en el grupo IM en comparación con el grupo EM indicó que la castración influyó en un segmento de la microbiota del rumen en las ovejas machos Xizang, fortaleciendo así la eficacia digestiva y metabólica del rumen en relación con la utilización de nutrientes, particularmente en la descomposición y absorción de proteínas, carbohidratos y lípidos, acelerando en última instancia el proceso de engorde y aumento de peso en las ovejas machos Xizang tras la castración. Además, el análisis de la metabolómica del líquido ruminal reveló que la inmunización con GnRH tuvo impactos notables en ciertos metabolitos en el líquido ruminal de las ovejas machos Xizang, con metabolitos como el ácido 5-hidroxiindolacético y el ácido 3-hidroxiindolacético mostrando una significativa regulación a la baja en el grupo IM en comparación con el grupo EM, mientras que la niacina y la tiramina exhibieron una regulación a la alta significativa. Estos hallazgos indican una profunda influencia de la inmunización con GnRH en el mantenimiento del equilibrio ruminal y la salud ruminal (incluida la salud de las células epiteliales del rumen). Este estudio valida que la inmunocastración con GnRH no solo logra los objetivos de la castración, sino que también mejora la salud ruminal en las ovejas machos Xizang, sentando así una base teórica fundamental para la aplicación y difusión de la tecnología de inmunocastración con GnRH.