Un método de inmovilización rentable para proteínas de fusión MBP en placas de microtitulación utilizando una mezcla de almidón gelatinizado-agarosa y su aplicación para un análisis conveniente de interacción proteína-proteína
Autores: Emoto, Yuri; Katayama, Ryoya; Hibino, Emi; Ishihara, Sho; Goda, Natsuko; Tenno, Takeshi; Kobashigawa, Yoshihiro; Morioka, Hiroshi; Hiroaki, Hidekazu
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2023
Acceso abierto
Artículo científico
2023
Un método de inmovilización rentable para proteínas de fusión MBP en placas de microtitulación utilizando una mezcla de almidón gelatinizado-agarosa y su aplicación para un análisis conveniente de interacción proteína-proteína
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Interacciones proteína-proteína
Proteínas recombinantes
Etiquetas de proteínas de fusión
Almidón gelatinizado
Agarosa
Placas de microtitulación
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 66
Citaciones: Sin citaciones
La detección y cuantificación de interacciones proteína-proteína (PPIs) es una técnica crucial que a menudo implica el uso de proteínas recombinantes con etiquetas de fusión de proteínas, como la proteína de unión a maltosa (MBP) y la glutatión-S-transferasa (GST). En este estudio, mejoramos las propiedades cohesivas y pegajosas del almidón gelatinizado al suplementarlo con agarosa, lo que resultó en un gel más duro que podría recubrir el fondo de una placa de microtitulación. La mezcla resultante de almidón gelatinizado/agarosa permitió la inmovilización eficiente de proteínas etiquetadas con MBP en las placas recubiertas, lo que posibilitó el uso de ensayos de PPI tipo ELISA indirecto. Al utilizar la actividad enzimática de la GST como indicador, logramos determinar las constantes de disociación entre proteínas etiquetadas con MBP y GST en placas de microtitulación de 96 pocillos y un lector de placas sin necesidad de ningún equipo especializado costoso.
Descripción
La detección y cuantificación de interacciones proteína-proteína (PPIs) es una técnica crucial que a menudo implica el uso de proteínas recombinantes con etiquetas de fusión de proteínas, como la proteína de unión a maltosa (MBP) y la glutatión-S-transferasa (GST). En este estudio, mejoramos las propiedades cohesivas y pegajosas del almidón gelatinizado al suplementarlo con agarosa, lo que resultó en un gel más duro que podría recubrir el fondo de una placa de microtitulación. La mezcla resultante de almidón gelatinizado/agarosa permitió la inmovilización eficiente de proteínas etiquetadas con MBP en las placas recubiertas, lo que posibilitó el uso de ensayos de PPI tipo ELISA indirecto. Al utilizar la actividad enzimática de la GST como indicador, logramos determinar las constantes de disociación entre proteínas etiquetadas con MBP y GST en placas de microtitulación de 96 pocillos y un lector de placas sin necesidad de ningún equipo especializado costoso.