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Un método de inmovilización rentable para proteínas de fusión MBP en placas de microtitulación utilizando una mezcla de almidón gelatinizado-agarosa y su aplicación para un análisis conveniente de interacción proteína-proteína

Autores: Emoto, Yuri; Katayama, Ryoya; Hibino, Emi; Ishihara, Sho; Goda, Natsuko; Tenno, Takeshi; Kobashigawa, Yoshihiro; Morioka, Hiroshi; Hiroaki, Hidekazu

Idioma: Inglés

Editor: MDPI

Año: 2023

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Acceso abierto

Artículo científico
2023

Un método de inmovilización rentable para proteínas de fusión MBP en placas de microtitulación utilizando una mezcla de almidón gelatinizado-agarosa y su aplicación para un análisis conveniente de interacción proteína-proteína


Categoría

Ingeniería y Tecnología

Subcategoría

Bioingeniería

Palabras clave

Interacciones proteína-proteína
Proteínas recombinantes
Etiquetas de proteínas de fusión
Almidón gelatinizado
Agarosa
Placas de microtitulación

Licencia

CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual

Consultas: 66

Citaciones: Sin citaciones


Descripción
La detección y cuantificación de interacciones proteína-proteína (PPIs) es una técnica crucial que a menudo implica el uso de proteínas recombinantes con etiquetas de fusión de proteínas, como la proteína de unión a maltosa (MBP) y la glutatión-S-transferasa (GST). En este estudio, mejoramos las propiedades cohesivas y pegajosas del almidón gelatinizado al suplementarlo con agarosa, lo que resultó en un gel más duro que podría recubrir el fondo de una placa de microtitulación. La mezcla resultante de almidón gelatinizado/agarosa permitió la inmovilización eficiente de proteínas etiquetadas con MBP en las placas recubiertas, lo que posibilitó el uso de ensayos de PPI tipo ELISA indirecto. Al utilizar la actividad enzimática de la GST como indicador, logramos determinar las constantes de disociación entre proteínas etiquetadas con MBP y GST en placas de microtitulación de 96 pocillos y un lector de placas sin necesidad de ningún equipo especializado costoso.

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