La insuficiencia hepática aguda (ALF) es una enfermedad potencialmente mortal caracterizada por el inicio rápido de bioquímica hepática anormal, coagulopatía y el desarrollo de encefalopatía hepática. Los injertos hepáticos bioingenierizados extracorpóreos (BEL) podrían ofrecer una terapia puente para el trasplante o la recuperación. El presente estudio describe la fabricación de BELs a escala clínica creados a partir de matriz extracelular hepática derivada de cerdo decelularizada sembrada completamente con células humanas: células endoteliales de vena umbilical humana (HUVECs) y células hepáticas humanas primarias (PHLCs). Se demostró que los andamios decelularizados sembrados completamente con células humanas cumplían con estrictas pautas de esterilidad y seguridad, y mostraban una funcionalidad aumentada en comparación con los injertos sembrados con células hepáticas porcinas primarias (PPLCs). Los BELs con PHLCs fueron capaces de eliminar más amoníaco que los PPLCs y mostraron presiones de perfusión más bajas durante las pruebas de permeabilidad. Además, para determinar el completo potencial terapéutico de los BELs sembrados con PHLCs, se evaluaron periodos de cultivo más largos para abordar las limitaciones logísticas asociadas con la fabricación y el transporte de un producto a un paciente. Los BELs completamente humanizados pudieron mantener su función después de un almacenamiento en frío simulando un periodo de transporte del producto. Por lo tanto, este estudio demuestra la fabricación de injertos hepáticos bioingenierizados y su potencial en el entorno clínico como tratamiento para la ALF.