Y-27632, como protector del citoesqueleto, se utiliza comúnmente para la preservación de células a baja temperatura. El esperma de cabra es propenso a daños en el citoesqueleto bajo condiciones de baja temperatura, lo que lleva a una pérdida de vitalidad del esperma. Sin embargo, la pequeña molécula Y-27632 aún no se ha utilizado en investigaciones sobre la preservación a baja temperatura del semen de cabra. Este estudio tiene como objetivo abordar el problema de la pérdida de motilidad del esperma inducida por bajas temperaturas en cabras mediante el uso de Y-27632, y explorar la regulación de Y-27632 sobre el metabolismo del esperma de cabra. A una baja temperatura de 4 grados C, se añadieron diferentes concentraciones de Y-27632 al diluyente de esperma. La regulación de Y-27632 sobre la calidad del semen de cabra preservado a baja temperatura se evaluó mediante la detección de la motilidad del esperma de cabra, la capacidad antioxidante, la actividad mitocondrial, los niveles de colesterol y el análisis metabolómico. Los resultados indicaron que 20 uM de Y-27632 aumentó significativamente la integridad de la membrana plasmática (< 0.05), la integridad del acrosoma (< 0.05) y la motilidad del esperma (< 0.05), aumentó los niveles de superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT) (< 0.01), aumentó la capacidad antioxidante total (T-AOC) (< 0.05), disminuyó los niveles de malondialdehído (MDA) y especies reactivas de oxígeno (ROS) (< 0.01), y aumentó significativamente el potencial de membrana mitocondrial (MMP). Los niveles de ATP, Ca y TC en el esperma aumentaron (< 0.01). Se identificaron veinte metabolitos con diferencias significativas, con seis vías metabólicas teniendo un impacto significativo, entre las cuales las vías metabólicas de D-glutamato y D-glutamina tuvieron el impacto más significativo. El efecto de la inseminación artificial del semen de cabra tratado con 20 uM de Y-27632 no fue significativamente diferente al del semen fresco. Este estudio indica que Y-27632 mejora la calidad de la preservación a baja temperatura del esperma al proteger la membrana plasmática del esperma, mejorar la capacidad antioxidante del esperma, regular el metabolismo de D-glutamina y D-glutamato, y promover la aplicación de la preservación a baja temperatura del semen en la tecnología de inseminación artificial.