La utilización de líneas de células madre pluripotentes (PSC) derivadas de embriones de pollo es crucial en varios campos, incluyendo el crecimiento y desarrollo, la producción de vacunas y proteínas, y la protección de recursos de germoplasma. Sin embargo, la base de investigación para las PSC de pollo es relativamente débil, y aún existen desafíos para establecer un sistema de cultivo de PSC estable y eficiente. Por lo tanto, este estudio tiene como objetivo investigar los efectos de las vías de señalización FGF2/ERK y WNT/beta-catenina, así como diferentes capas de alimentación, en la derivación y mantenimiento de PSC derivadas de embriones de pollo. Los resultados de este estudio demuestran que el uso de células STO como capas de alimentación, junto con la adición de FGF2, IWR-1 y XAV-939 (FIX), permite la derivación eficiente de células similares a PSC de pollo. Bajo las condiciones de cultivo FIX, las PSC de pollo expresan genes clave de pluripotencia, como , , y , así como proteínas específicas SSEA-1, C-KIT y SOX2, lo que indica su naturaleza pluripotente. Además, el experimento del cuerpo embrioide confirma que estas células similares a PSC pueden diferenciarse en células de las tres capas germinales in vitro, destacando su potencial para la diferenciación multinivel. Además, este estudio revela que las células blastodérmicas en etapa X de Eyal-Giladi y Kochav de pollo expresan genes relacionados con el estado primado de las PSC, y el sistema de cultivo FIX establecido en esta investigación mantiene la expresión de estos genes in vitro. Estos hallazgos contribuyen significativamente a la comprensión y optimización de las condiciones de cultivo de PSC de pollo y proporcionan una base para una mayor exploración de la investigación biomédica y las aplicaciones biotecnológicas de las PSC de pollo.