Los machos de cashmere de Yanshan son animales de cría estacional y un importante recurso genético nacional. Este estudio tuvo como objetivo investigar la participación de la prolactina (PRL) en la función epididimal de los machos. Veinte machos de cashmere de once meses fueron divididos aleatoriamente en un grupo de control (CON) y un grupo de tratamiento con bromocriptina (BCR, un inhibidor de la prolactina, 0.06 mg/kg de peso corporal (PC)). El experimento se llevó a cabo de septiembre a octubre de 2020 en la ciudad de Qinhuangdao, China, y duró 30 días. Se recogió sangre el último día antes del tratamiento con BCR (día 0) y en el día 15 y 30 después del tratamiento con BCR (días 15 y 30). En el día 30, todos los machos fueron transportados al matadero local, donde se recogieron muestras epididimarias inmediatamente después del sacrificio. El epidídimo izquierdo se conservó en paraformaldehído al 4% para observación histológica, y el epidídimo derecho se conservó inmediatamente en nitrógeno líquido para secuenciación de ARN (RNA-seq). Los resultados muestran que el inhibidor de PRL redujo las concentraciones de PRL sérica y estradiol (E2) (< 0.05) y tendió a disminuir las concentraciones de hormona luteinizante (LH) (= 0.052) para el día 30, pero no se observaron diferencias (> 0.05) ni en el día 0 ni en el día 15. No se observaron diferencias (> 0.05) en las concentraciones de hormona foliculoestimulante (FSH), testosterona (T) y dihidrotestosterona (DHT) entre los dos grupos. La proteína del receptor de PRL (PRLR) se localizó principalmente en el citoplasma y la sustancia intercelular de las células epiteliales epididimarias. El inhibidor de PRL disminuyó (< 0.05) la expresión de la proteína PRLR en el epidídimo. En el grupo BCR, la altura del epitelio epididimal en el caput y cauda aumentó, al igual que el diámetro del conducto epididimal en el caput (< 0.05). Sin embargo, el diámetro del conducto epididimal caudal disminuyó (< 0.05). Posteriormente, se identificaron un total de 358 genes expresados diferencialmente (DEGs) en los tejidos epididimarios, de los cuales 191 estaban regulados al alza y 167 al baja. Los análisis de Gene Ontology y la Enciclopedia de Genes y Genomas de Kyoto revelaron que, , , , y estaban principalmente enriquecidos en la vía de señalización de estrógenos, unión a esteroides, unión a iones de calcio, la vía de señalización de GnRH, la vía de señalización de cAMP y la vía de carcinogénesis química-especies reactivas de oxígeno, que están relacionadas con la función epididimal. En conclusión, la inhibición de PRL puede afectar la estructura del epidídimo al reducir la expresión de la proteína PRLR y la secreción de E2. , , , , y podrían ser los genes clave de PRL en su regulación de la función reproductiva epididimal.