Los Ghats Occidentales, India, son un punto caliente para la diversidad de líquenes. Sin embargo, la importancia farmacológica de los metabolitos asociados a los líquenes sigue sin aprovecharse. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el potencial citotóxico de los líquenes de esta región. Para ello, se recolectaron e identificaron dieciséis macrolíquenes de dos ubicaciones en los Ghats Occidentales. El extracto de acetona de (UC2A) mostró una citotoxicidad significativa hacia múltiples líneas celulares de cáncer humano. Curiosamente, el co-tratamiento con cloroquina (CQ), un inhibidor de la autofagia, aumentó el potencial citotóxico del extracto UC2A. Un estudio de cromatografía de gases y espectrometría de masas (GCMS) reveló que el ácido usnico (UA), el ácido atrárico y el ácido barbático son los compuestos citotóxicos dominantes en el extracto UC2A. Además, el UA fue purificado e identificado del extracto UC2A y evaluado por su citotoxicidad en células HeLa. La doble tinción con monodansilo cadaverina y mitotracker rojo reveló las actividades inductoras de autofagia del UA, y la inhibición de la autofagia fue confirmada mediante el tratamiento con CQ. La inhibición de la autofagia aumentó la citotoxicidad del UA en un 12-16% de manera dependiente de la concentración. También aumentó la peroxidación lipídica, los niveles de ROS y la despolarización mitocondrial, y disminuyó la disponibilidad de glutatión. También se observó una disminución en el potencial zeta y un aumento del 40% en la actividad de caspasa 3/7 después del tratamiento con CQ de células tratadas con UA. Así, la citotoxicidad del UA puede aumentarse inhibiendo la autofagia.