La lignocelulosa es el componente ambiental más abundante y un recurso orgánico renovable en el suelo. Algunos hongos filamentosos han desarrollado la capacidad de descomponer y utilizar celulosa, hemicelulosa y lignina como fuente de energía. El objetivo de esta investigación fue analizar el efecto de tres fuentes de nitrógeno (sulfato de amonio, salitre y soja) en la actividad holocelulolítica de Lentinula edodes EF 50 utilizando aserrín de E. benthamii como sustrato. Se aplicó una mezcla de diseño experimental con repetición en el punto central, compuesta por siete tratamientos (T) con concentraciones iguales de nitrógeno en sulfato de amonio, nitrato de potasio y soja. Se determinó la actividad enzimática de avicelasa, carboximetilcelulosa, β-glucosidasa, xilanasas y peroxidasa de manganeso. Se evaluaron la humedad, el pH, la actividad hídrica (aw) y el análisis cualitativo del crecimiento micelial en ocho etapas de cultivo. Los resultados mostraron un efecto negativo en la producción de enzimas en los tratamientos con la máxima concentración de sulfato de amonio y nitrato de potasio. Los tratamientos con harina de soya cocida mostraron mayor actividad enzimática a los 3, 6 y 9 días de cultivo, excepto en la actividad de la peroxidasa de manganeso. La mayor producción se observó en el tratamiento con sulfato de amonio y soya (83,86 UI.L–1) a los 20 días de cultivo.