En nuestro cuerpo, los pulmones, la piel y el intestino representan barreras anatómicas que enfrentan diferentes estímulos ambientales. Estas estructuras pueden sufrir modificaciones bajo condiciones específicas como enfermedad, disbiosis, apoptosis y envejecimiento. En la disbiosis, la pérdida de comensales y la colonización de patógenos oportunistas modifican la permeabilidad de las uniones estrechas. La apoptosis causa una permeabilidad incontrolada de las uniones estrechas. La necesidad de establecer modelos experimentales que imiten estos cambios es un desafío real. En el intestino, las células absorbentes, es decir, los enterocitos, y las células que secretan moco, es decir, las células caliciformes, contribuyen a la barrera intestinal. Caracterizamos las modificaciones que ocurren en una co-cultura in vitro de células Caco2 (enterocitos)/HT-29 (células caliciformes) a lo largo del tiempo. La co-cultura formada por células parentales Caco2 y HT-29 cultivadas en pasajes altos mostró una mayor permeabilidad en comparación con la co-cultura formada por células parentales en pasajes de cultivo bajos. Estas modificaciones se vincularon a un cambio en la composición proteica de las uniones involucradas en el mantenimiento de la barrera. El moco también se redujo en la co-cultura de células parentales de alto pasaje. Las características aquí reportadas indican un deterioro de la barrera intestinal comparable al encontrado en el intestino envejecido. Este modelo experimental in vitro ofrece la posibilidad de investigar el impacto de nutrientes, medicamentos y suplementos en la barrera epitelial intestinal a lo largo del tiempo.