El crecimiento folicular ex vivo es una herramienta esencial que permite la interrogación de la foliculogénesis, la ovulación y la luteinización. Aunque se han logrado avances significativos, las estrategias de cultivo folicular existentes pueden ser técnicamente desafiantes y laboriosas. En este estudio, avanzamos en el campo a través del desarrollo de un micromolde de agarosa personalizado, que permite el cultivo folicular sin andamiaje. Establecimos un método de fabricación accesible y económico utilizando impresión 3D y moldeo de silicona que genera moldes de hidrogel biocompatibles sin el riesgo de citotoxicidad por lixiviados. Cada molde soporta el cultivo simultáneo de múltiples folículos secundarios multicapa en un solo plano focal, lo que permite un monitoreo constante en lapso de tiempo y análisis automatizado. Los folículos de ratón cultivados utilizando este novedoso sistema muestran un crecimiento significativamente mejorado y resultados de ovulación con una supervivencia comparable, maduración de ovocitos y perfiles de producción hormonal como los sistemas de crecimiento folicular in vitro encapsulados tridimensionales establecidos (eIVFG). Además, los folículos recapitularon aspectos de la fisiología de la ovulación in vivo con respecto a su arquitectura y polarización espacial, lo que no se ha observado en los sistemas eIVFG. Este sistema ofrece simplicidad, escalabilidad, integración con análisis morfocinéticos del crecimiento folicular y ovulación, y compatibilidad con plataformas microfisiológicas existentes. Esta estrategia de cultivo tiene implicaciones para la biología folicular fundamental, estrategias de preservación de la fertilidad, toxicología reproductiva y descubrimiento de fármacos anticonceptivos.