Uno de los caminos celulares más conservados entre los eucariotas es la vía clásica de importación nuclear de proteínas, mediada por importina-alfa, que ha sido ampliamente estudiada. Las señales de localización nuclear clásicas (cNLS) son reconocidas por importina-alfa y son altamente predecibles debido a su abundancia de aminoácidos básicos. Sin embargo, varios estudios en organismos modelo han demostrado repetidamente que solo una fracción de las proteínas nucleares contiene cNLS identificables, incluidas aquellas que interactúan directamente con importina-alfa. Utilizando datos del Atlas de Proteínas Humanas y el Interactoma de Referencia Humano, así como datos proteómicos de estudios de BioID/etiquetado de proximidad de proteínas utilizando múltiples proteínas importina-alfa humanas, determinamos que casi el 50% del proteoma nuclear humano no tiene un cNLS predecible. Sorprendentemente, entre el 25% y el 50% de las cargas de importina-alfa humanas previamente identificadas no tienen un cNLS predecible. El análisis de las cargas de importina-alfa sin un cNLS identificó un motivo alternativo rico en básicos que no se asemeja a un cNLS. Además, se identificaron varias proteínas sospechosas de "piggybacking", como las que pertenecen a los complejos de ARN polimerasa II y factor de transcripción II D. Adicionalmente, muchos componentes del complejo mediador interactúan con al menos una importina-alfa, pero no tienen un cNLS predecible, lo que sugiere que muchas de las subunidades pueden entrar al núcleo a través de un mecanismo de "piggybacking" dependiente de importina-alfa.