Los rizobios pueden establecer interacciones mutuamente beneficiosas con las plantas leguminosas al colonizar sus raíces para inducir la formación de una estructura especializada conocida como nódulo, dentro de la cual las bacterias pueden fijar nitrógeno atmosférico. Está bien establecido que la compatibilidad de tales interacciones está determinada principalmente por el reconocimiento bacteriano de flavonoides secretados por las plantas, que en respuesta a estos flavonoides desencadenan la síntesis de los factores Nod bacterianos que impulsan el proceso de nodulación. Además, otras señales bacterianas están involucradas en el reconocimiento y la eficiencia de esta interacción, como los polisacáridos extracelulares o algunas proteínas secretadas. Algunas cepas de rizobios inyectan proteínas a través del sistema de secreción tipo III al citosol de las células de raíz de leguminosas durante el proceso de nodulación. Tales proteínas, llamadas efectores secretados por tipo III (T3E), ejercen su función en la célula huésped y están involucradas, entre otras tareas, en la atenuación de las respuestas de defensa del huésped para facilitar la infección, contribuyendo a la especificidad del proceso. Uno de los principales desafíos de estudiar los T3E rizobiales es la dificultad inherente de localizarlos in vivo en los diferentes compartimentos subcelulares dentro de sus células huésped, ya que además de su baja concentración en condiciones fisiológicas, no siempre se sabe cuándo o dónde se están produciendo y secretando. En este artículo, utilizamos un T3E rizobial bien conocido, llamado NopL, para ilustrar mediante un enfoque multitarea dónde se localiza en modelos de huéspedes heterólogos, como las células de hojas de planta de tabaco, y también por primera vez en células animales transfectadas y/o infectadas. La consistencia de nuestros resultados sirve como un ejemplo para estudiar la ubicación dentro de las células eucariotas de efectores en distintos huéspedes con diferentes técnicas de manejo que pueden ser utilizadas en casi todos los laboratorios de investigación.