El peso de prueba, uno de los principales indicadores de la calidad de las semillas de soja, se mide como la cantidad de semillas de soja en kilogramos que pueden caber en un hectolitro. El precio que los cultivadores reciben por su soja depende del peso de prueba. En los últimos 50 años, los cultivadores han observado una tendencia a la baja en el peso de prueba. Por lo tanto, es imperativo comprender mejor la relación entre el peso de prueba de la soja y otros rasgos para permitir a los criadores seleccionar líneas parentales con altos pesos de prueba en los programas de cría para garantizar la rentabilidad del cultivador. Los objetivos del estudio fueron identificar marcadores genéticos asociados con un alto peso de prueba en soja y determinar la correlación entre un alto peso de prueba y cinco importantes rasgos de composición de semillas (contenido de proteína, aceite, sacarosa, rafinosa y estaquiosa). Se cultivaron germoplasmas de grupos de madurez IV y V de la colección de germoplasma de soja del USDA en Blacksburg y Varsovia en Virginia desde 2019 hasta 2021 y se midieron todos los rasgos mencionados. Los resultados muestran que los valores de peso de prueba variaron de 62 a 77 kg/hL durante los tres años. Se encontraron múltiples polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) significativamente asociados con un alto peso de prueba en el cromosoma (Chr.) 15, junto con un par en el cromosoma 14, y se encontraron 11 genes candidatos cerca de estos SNP. Se encontró que el peso de prueba estaba significativamente correlacionado negativamente con el contenido de aceite, correlacionado de manera inconsistente con el contenido de proteína en todos los entornos, y correlacionado negativamente pero no significativamente con los tres azúcares, excepto con la rafinosa en Blacksburg 2019. Concluimos que los genes que subyacen al peso de prueba podrían estar en el cromosoma 15, y los SNP asociados validados podrían usarse para ayudar en la selección de cría del peso de prueba. Los criadores deben prestar especial atención al peso de prueba al seleccionar un alto contenido de aceite en soja debido a su correlación negativa.