logo móvil
Contáctanos

Un método rápido y preciso para identificar y cuantificar enzimas en membranas de borde en cepillo: hidrólisis in situ seguida de nano LC-MS/MS

Autores: Brun, Antonio; Magallanes, Melisa E.; Martínez del Rio, Carlos; Barrett-Wilt, Gregory A.; Karasov, William H.; Caviedes-Vidal, Enrique

Idioma: Inglés

Editor: MDPI

Año: 2020

Descargar PDF

Acceso abierto

Artículo científico
2020

Un método rápido y preciso para identificar y cuantificar enzimas en membranas de borde en cepillo: hidrólisis in situ seguida de nano LC-MS/MS


Categoría

Ingeniería y Tecnología

Subcategoría

Bioingeniería

Palabras clave

Identificación
Membrana de cepillo borde
Alfa-glucosidasas
Gel
Soluciones de sustrato
Nano LC-MS/MS

Licencia

CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual

Consultas: 33

Citaciones: Sin citaciones


Descripción
Se describe un método sencillo para la identificación de alfa-glucosidasas de la membrana del borde en cepillo. Los proteínas fueron primero solubilizadas y separadas en un gel bajo condiciones nativas, no desnaturalizantes. El gel fue luego incubado en soluciones de sustrato (maltosa o sacarosa), y el producto (glucosa) expuesto in situ por la oxidación de o-dianisidina, lo que produce un color marrón-naranja. El análisis de proteínas mediante cromatografía líquida nanoacoplada a espectrometría de masas (nano LC-MS/MS) de las bandas coloreadas extraídas de los geles, se utilizó para confirmar la presencia de las enzimas. La tinción es económica y el procedimiento permite probar varios sustratos en el mismo gel. Una vez que las enzimas son identificadas, su abundancia, en relación con la de otras proteínas en el borde en cepillo, puede ser semicuantificada utilizando nano LC-MS/MS.

Otros recursos que podrían interesarte

Temas Virtualpro