Un método rápido y preciso para identificar y cuantificar enzimas en membranas de borde en cepillo: hidrólisis in situ seguida de nano LC-MS/MS
Autores: Brun, Antonio; Magallanes, Melisa E.; Martínez del Rio, Carlos; Barrett-Wilt, Gregory A.; Karasov, William H.; Caviedes-Vidal, Enrique
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2020
Acceso abierto
Artículo científico
2020
Un método rápido y preciso para identificar y cuantificar enzimas en membranas de borde en cepillo: hidrólisis in situ seguida de nano LC-MS/MS
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Identificación
Membrana de cepillo borde
Alfa-glucosidasas
Gel
Soluciones de sustrato
Nano LC-MS/MS
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 33
Citaciones: Sin citaciones
Se describe un método sencillo para la identificación de alfa-glucosidasas de la membrana del borde en cepillo. Los proteínas fueron primero solubilizadas y separadas en un gel bajo condiciones nativas, no desnaturalizantes. El gel fue luego incubado en soluciones de sustrato (maltosa o sacarosa), y el producto (glucosa) expuesto in situ por la oxidación de o-dianisidina, lo que produce un color marrón-naranja. El análisis de proteínas mediante cromatografía líquida nanoacoplada a espectrometría de masas (nano LC-MS/MS) de las bandas coloreadas extraídas de los geles, se utilizó para confirmar la presencia de las enzimas. La tinción es económica y el procedimiento permite probar varios sustratos en el mismo gel. Una vez que las enzimas son identificadas, su abundancia, en relación con la de otras proteínas en el borde en cepillo, puede ser semicuantificada utilizando nano LC-MS/MS.
Descripción
Se describe un método sencillo para la identificación de alfa-glucosidasas de la membrana del borde en cepillo. Los proteínas fueron primero solubilizadas y separadas en un gel bajo condiciones nativas, no desnaturalizantes. El gel fue luego incubado en soluciones de sustrato (maltosa o sacarosa), y el producto (glucosa) expuesto in situ por la oxidación de o-dianisidina, lo que produce un color marrón-naranja. El análisis de proteínas mediante cromatografía líquida nanoacoplada a espectrometría de masas (nano LC-MS/MS) de las bandas coloreadas extraídas de los geles, se utilizó para confirmar la presencia de las enzimas. La tinción es económica y el procedimiento permite probar varios sustratos en el mismo gel. Una vez que las enzimas son identificadas, su abundancia, en relación con la de otras proteínas en el borde en cepillo, puede ser semicuantificada utilizando nano LC-MS/MS.