Este estudio tuvo como objetivo desarrollar un método sistemático para evaluar la tolerancia al frío de plántulas de brócoli, lo cual es útil para evaluar la tolerancia al frío de los cultivares de brócoli. Se seleccionaron 14 cultivares clásicos de brócoli y se evaluó su tolerancia al frío examinando indicadores fisiológicos como los niveles de resistencia al frío, conductividad eléctrica, malondialdehído (MDA), azúcar soluble y peróxido de hidrógeno (HO). Los resultados mostraron que hubo diferencias significativas en las características detectadas en todos los cultivares después del estrés por frío durante la etapa de plántula. Entre ellos, Meiqing mostró la mayor tolerancia al frío, seguido por King 11, Zhongqing 15, Meiao 7172, Zhongqing 318, Zheqing 80, Zhongqing 16, Zhongqing 319 y Lvxiong 90. Sin embargo, Zhongqing 11, Yanxiu, Qianghan y Feicui 5 mostraron la peor tolerancia al frío (todos murieron). El análisis de correlación de Pearson indicó que había una correlación negativa significativa entre la tolerancia al frío y la conductividad eléctrica durante la etapa de plántula de brócoli, con un coeficiente de correlación de -0.586. Al mismo tiempo, encontramos que la conductividad eléctrica de todos los cultivares de brócoli mostraba una correlación positiva con los niveles de MDA y azúcar soluble, con coeficientes de correlación de 0.650 y 0.573, respectivamente. Este estudio no solo proporciona por primera vez un método fundamental para evaluar la tolerancia al frío en diferentes genotipos de brócoli y otras verduras crucíferas, sino que también ofrece evidencia científica que explica la tolerancia al frío de los cultivares Meiqing, King 11 y Zhongqing 15 ampliamente cultivados en China.