El lúpulo (L.) es un ingrediente menor en la producción de cerveza, pero tiene una fuerte influencia en la calidad de la cerveza debido a la alta complejidad química de los conos utilizados en la elaboración. Uno de los principales factores que puede afectar gravemente la composición química de los conos de lúpulo y su comercialización es la presencia de infecciones virales en la planta. Entre los cinco principales virus del lúpulo, tres pertenecen al género: virus del mosaico del lúpulo (HpMV), virus latente del lúpulo (HpLV) y virus latente americano del lúpulo (AHLV). La aparición de carlavirus en el germoplasma de lúpulo en Italia se registró por primera vez en 2017, pero, en ese contexto, solo se realizó una detección genérica y no se proporcionó información sobre las especies infectantes. Para llenar este vacío, se analizaron 51 muestras de lúpulo previamente encontradas infectadas por carlavirus mediante RT-PCR utilizando pares de cebadores específicos para la proteína de la cápside (CP) de HpMV, HpLV y AHLV, respectivamente. HpLV resultó ser ampliamente prevalente, ya que se detectó en el 96.1% de las muestras analizadas, mientras que para HpMV y AHLV se registró una tasa de infección del 5.9% y 3.9%, respectivamente. Se obtuvieron y analizaron secuencias nucleotídicas de CP de 13 aislamientos virales seleccionados; además, se obtuvo la secuencia del genoma completo de 7 aislamientos utilizando secuenciación de alto rendimiento (HTS). El análisis filogenético mostró relaciones cercanas entre aislamientos de diferentes orígenes geográficos, incluidos países europeos y no europeos, de acuerdo con el movimiento mundial del germoplasma de lúpulo debido al comercio global. Este es el primer informe de HpMV, HpLV y AHLV en germoplasma de lúpulo en Italia.