Para predecir el papel de la familia de genes en la respuesta al estrés abiótico, en este estudio se realizaron análisis bioinformáticos y PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real. El trébol () es uno de los cultivos más valiosos económicamente a nivel mundial. El inductor de la expresión de CBF (ICE), que forma parte de la familia de factores de transcripción de bucle hélice-hélice básico (bHLH), actúa como un regulador clave de la tolerancia al frío. A pesar de esto, hay poca información disponible sobre los genes en el trébol. Por lo tanto, estudiamos la función de los factores de transcripción ICE en el trébol. Identificamos 11 genes del genoma del trébol y los clasificamos en dos grupos. El análisis del motivo de la proteína y la estructura de los genes reveló una conservación relativamente alta entre los subgrupos de genes estrechamente agrupados. A través del análisis de sintenia, detectamos eventos de duplicación en la familia de genes, lo que sugiere que la familia de genes se formó a través de duplicaciones de fragmentos. Todas las proteínas MsICE estaban localizadas en el núcleo según las predicciones de localización subcelular. Los elementos -reguladores del promotor de los genes están principalmente involucrados en respuestas a la luz (Box 4), hormonas (ABRE) y estrés (MYB). Los genes contenían motivos de unión a MYB y MYC, lo que indica una asociación con el estrés abiótico. Los patrones de expresión específicos de los genes en las hojas fueron revelados al examinar sus patrones de expresión en diferentes tejidos. Estos hallazgos sugieren que estos genes pueden percibir cambios ambientales externos a través de las hojas. El estrés abiótico puede causar una marcada sobreexpresión de la expresión de (puntuación de PCA: -4,03) y (puntuación de PCA: -4,05). En este estudio, se identificaron genes candidatos asociados con el estrés por frío, y análisis biológicos moleculares subsiguientes permitieron dilucidar las funciones biológicas de estos genes en el trébol. Esta investigación proporciona una base teórica para mejorar el rendimiento y la calidad del trébol en condiciones de frío.