La envenenación por mordedura de serpiente es un importante problema de salud pública con consecuencias devastadoras y tasas de mortalidad anuales que oscilan entre 81,000 y 138,000. Los venenos de serpiente pueden causar una variedad de efectos patofisiológicos que afectan el sistema nervioso y el sistema cardiovascular. Además, el veneno de serpiente puede tener actividades dañinas para los tejidos que resultan en morbilidades de por vida, como amputaciones, degeneración muscular y mal funcionamiento de órganos. Los componentes dañinos para los tejidos en los venenos de serpiente comprenden múltiples clases de toxinas con varios objetivos moleculares, incluyendo membranas celulares y la matriz extracelular (MEC). En este estudio, presentamos múltiples formatos de ensayo que permiten investigar la degradación de la MEC inducida por veneno de serpiente utilizando una variedad de componentes de MEC etiquetados con fluorescencia (con colorante apagado). Usando un enfoque combinatorio, pudimos caracterizar diferentes perfiles proteolíticos para diferentes venenos de serpiente de relevancia médica, seguidos de la identificación de los componentes responsables dentro de los venenos de serpiente. Este flujo de trabajo podría proporcionar valiosos conocimientos sobre los mecanismos clave mediante los cuales los componentes proteolíticos del veneno ejercen sus efectos y, por lo tanto, podría resultar útil para el desarrollo de tratamientos efectivos contra las mordeduras de serpiente para esta patología severa.