Los multi-epítopos del FMDV se pueden utilizar para desarrollar una nueva vacuna. Determinar cómo seleccionar péptidos epítopos que se presentan de forma natural y derivados del FMDV es crucial para avanzar en este área. En este estudio, se transfirió un plásmido de expresión transitoria llamado pEGFP-N1-VP1 a células epiteliales renales porcinas 15 (PK15). Las células positivas que expresaban de manera estable el gen del FMDV se seleccionaron con concentraciones graduales de G418 (Geneticina). La línea celular pEGFP-N1-VP1/PK15 construida se eluyó con un tampón fosfato a pH 3.3 para aislar los péptidos eluidos, seguido de desalinización, cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS), un análisis citométrico de flujo de la expresión de SLA-I y una detección ELISA de péptidos unidos a SLA-I. Se demostró que una línea celular PK15 que expresa de manera estable el gen fue inicialmente seleccionada a 500 g/mL de G418, seguida de un cultivo a 300 g/mL. La expresión de O-VP1 se identificó utilizando un sistema de análisis de imágenes, RT-PCR y análisis por Western blot. Treinta y siete péptidos derivados de O-VP1 fueron eluidos de la línea celular construida. Los resultados del análisis citométrico de flujo y la detección ELISA mostraron que los péptidos eluidos estaban asociados y unidos a SLA-I. Este es el primer estudio conocido que construye una línea celular para seleccionar péptidos antigénicos que se presentan de forma natural y derivados del serotipo O del FMDV.