La fiebre porcina africana, causada por el virus de la fiebre porcina africana (ASFV), es una enfermedad porcina aguda y altamente contagiosa con alta mortalidad. Para facilitar el desarrollo efectivo de vacunas y encontrar más objetivos serodiagnósticos, es urgente explorar completamente las proteínas antigénicas del ASFV. En este estudio, se identificó el MGF_110-13L como un antígeno inmunodominante entre las siete proteínas de membrana transmembrana. Se expresó y purificó el dominio principal de la membrana externa de MGF_110-13L. Se generaron dos anticuerpos monoclonales (mAbs; 8C3 y 10E4) contra MGF_110-13L. Los epítopos de los dos mAbs se mapearon preliminarmente con las proteínas de fusión peptídica después de la prueba con mAbs mediante un ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA) y Western blot. Y los dos epítopos objetivo se mapearon con más precisión utilizando una estrategia de proteína de fusión peptídica truncada. Finalmente, las secuencias centrales de los mAbs 8C3 y 10E4 se identificaron como WDCQDGICKNKITESRFIDS y GDHQQLSIKQ, respectivamente. Los péptidos de los epítopos se sintetizaron y se probaron con sueros de cerdos positivos para anticuerpos de ASFV mediante un ensayo de dot blot, y los resultados mostraron que el epítopo 10E4 era un epítopo antigénico. El péptido del epítopo 10E4 se evaluó además como un posible antígeno para detectar anticuerpos de ASFV. Hasta donde sabemos, este es el primer informe sobre la información del epítopo antigénico de la proteína antigénica MGF_110-13L del ASFV.