El hongo medicinal ha ganado una atención significativa debido a sus propiedades beneficiosas. Los ácidos fenólicos se encuentran entre los principales compuestos bioactivos en el hongo, conocidos por sus actividades antioxidantes y antiinflamatorias. Para cuantificar con precisión el contenido de ácidos fenólicos, desarrollamos un método que utiliza cromatografía líquida de ultra alto rendimiento con triple cuadrupolo (UHPLC-QqQ). Este estudio optimizó las condiciones de UHPLC-QqQ para separar y detectar simultáneamente ocho ácidos fenólicos en (Pilát) L.W. Zhou y Y.C. Dai, incluyendo ácido clorogénico, ácido -cumarico, ácido cafeico, ácido criptoclorogénico, ácido protocatecuico, ácido ferúlico, ácido sinápico y ácido siringico. El proceso de separación utilizó una columna ZORBAX Eclipse Plus C18 usando 0.01% de ácido fórmico y 2 mmol/L de formiato de amonio en agua como fase acuosa y metanol que contiene 0.01% de ácido fórmico y 2 mmol/L de formiato de amonio como fase orgánica. Se construyeron curvas de calibración utilizando soluciones estándar para determinar cuantitativamente el contenido de ácidos fenólicos. Los resultados mostraron una variación significativa en el contenido de ácidos fenólicos entre los cuerpos fructíferos, siendo el ácido protocatecuico, el ácido -cumarico y el ácido cafeico los más abundantes. Este método es valioso para cuantificar compuestos de ácidos fenólicos bajo diferentes condiciones de cultivo. Proporciona una excelente sensibilidad, selectividad y reproducibilidad para la cuantificación de ácidos fenólicos en el hongo, contribuyendo a una mejor comprensión de su composición química y beneficios potenciales para la salud. Este enfoque representa un medio técnico novedoso para el análisis simultáneo de ácidos fenólicos compuestos en cuerpos fructíferos.