El presente estudio tuvo como objetivo evaluar la actividad antibacteriana y antibiofilm in vitro del hidrogel de celulosa bacteriana producido por sp. (HIDROGEL) que contiene vancomicina (VAN) contra cepas bacterianas que causan infecciones en heridas, como las resistentes a múltiples fármacos (MDR). Inicialmente, se obtuvo HIDROGEL de melaza de caña de azúcar, y se realizó microscopía electrónica de barrido (SEM) para determinar características morfológicas. Luego, se incorporó VAN en HIDROGEL (VAN-HIDROGEL). La actividad antibacteriana de VAN, HIDROGEL y VAN-HIDROGEL se evaluó utilizando el método de microdilución en caldo para determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) y la concentración mínima bactericida (CMB) contra meticilina-sensible (MSSA) ATCC 25923, meticilina-resistente (MRSA) ATCC 33591, INCQS 00016 (ATCC 12228), cinco aislamientos clínicos de MRSA y nueve aislamientos clínicos de meticilina-resistente, siguiendo las directrices del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI). Además, se estudió la actividad antibacteriana de VAN, HIDROGEL y VAN-HIDROGEL utilizando el ensayo de tiempo-muerte. Posteriormente, se evaluó la actividad antibiofilm de VAN, HIDROGEL y VAN-HIDROGEL utilizando métodos de cristal violeta y rojo de Congo, así como análisis SEM. VAN y VAN-HIDROGEL mostraron actividad bacteriostática y bactericida contra MRSA y cepas resistentes a meticilina. HIDROGEL no mostró ninguna actividad antibacteriana. El análisis del ensayo de tiempo-muerte indicó que HIDROGEL mantuvo la eficacia antibacteriana de VAN, destacando su eficiencia como un portador prometedor. En cuanto a la actividad antibiofilm, VAN y HIDROGEL inhibieron la formación de biofilm, pero no demostraron actividad de erradicación de biofilm contra meticilina-resistente y cepas. Sin embargo, se observó que el potencial de erradicación de biofilm de VAN se mejoró tras su incorporación en HIDROGEL, un resultado también comprobado a través de imágenes obtenidas por SEM. A partir de los métodos realizados en este estudio, fue posible observar que HIDROGEL preservó la actividad antibacteriana de la vancomicina, además de exhibir actividad antibiofilm y mejorar el efecto antibiofilm de VAN. En conclusión, este estudio demostró el potencial de HIDROGEL como candidato y/o vehículo para antibióticos contra bacterias MDR que causan infecciones en heridas.