Antecedentes: La EII es un espectro de patologías caracterizadas por una activación inmune desregulada que conduce a una respuesta incontrolada contra el intestino, lo que resulta en inflamación intestinal crónica y daño tisular. Debido a su complejidad, los mecanismos moleculares responsables del inicio y la progresión de la enfermedad siguen siendo elusivos, lo que requiere un intenso esfuerzo de investigación. En este contexto, el desarrollo de modelos que replican la etiopatología de la EII y que permiten probar nuevas terapias potenciales es crítico. Métodos: El colon de ratones C57BL/6 o BALB/c se cultivó en un Sistema Gut-Ex-Vivo (GEVS), expuesto durante 5 h a DNBS 1.5 o 2.5 mg/mL, en presencia o ausencia de dos formulaciones probióticas (P1 = BR03 (DSM16604) y B632 (DSM24706); P2 = LR04 (DSM16605), LP14 (DSM33401) y LPC09), y se evaluaron los principales rasgos distintivos de la EII. Resultados: El análisis de expresión génica reveló los siguientes efectos inducidos por DNBS: (i) organización comprometida de las uniones estrechas, responsable de la desregulación de la permeabilidad tisular; (ii) inducción de estrés en el retículo endoplásmico, y (iii) inflamación tisular en el colon de ratones C57BL/6. Además, las vías de apoptosis y ferroptosis inducidas por DNBS fueron evidentes en el colon de ratones tanto BALB/c como C57BL/6. Finalmente, la co-administración de probióticos previno completamente los efectos perjudiciales de DNBS. Conclusiones: En general, hemos proporcionado resultados que demuestran que el GEVS es un sistema consistente, confiable y rentable para modelar la EII inducida por DNBS, útil para estudiar el inicio y la progresión de la enfermedad humana a nivel molecular, al tiempo que se reduce el sufrimiento animal. Además, hemos confirmado el efecto beneficioso de la administración de probióticos en la promoción de la remisión de la EII.