La enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA), caracterizada por la acumulación de lípidos en el hígado, es la causa más común de enfermedades hepáticas en los países occidentales. La EHGNA es un factor de riesgo importante para desarrollar carcinoma hepatocelular (CHC); sin embargo, la evaluación in vitro de la cancerogénesis hepática falla debido a la falta de modelos hepáticos que muestren una proliferación de hepatocitos. Originalmente diseñados para superar la escasez de hepatocitos humanos primarios (PHP), los hepatocitos upcyte fueron diseñados para obtener una proliferación continua y, por lo tanto, podrían ser una herramienta adecuada para la investigación del CHC. Generamos hepatocitos upcyte, denominados células HepaFH3, y comparamos sus características metabólicas con las células de hepatoma HepG2 y los PHP aislados de hígados resecados. Para mostrar CHC relacionados con EHGNA, inducimos esteatosis en todos los modelos hepáticos. La acumulación de lípidos, la lipotoxicidad y el metabolismo energético se caracterizaron utilizando ensayos bioquímicos y análisis de Western blot. Mostramos que las células HepaFH3 en proliferación se asemejan a HepG2, mostrando ambas una tasa de captación de glucosa, niveles de lactato y tasa metabólica más altos en comparación con los PHP. Las células HepaFH3 en confluencia mostraron algunas similitudes con los PHP, incluyendo niveles más altos de las transaminasas AST y ALT en comparación con las células HepaFH3 en proliferación. Recomendamos las células HepaFH3 en proliferación como un modelo celular pre-maligno para la investigación del CHC, mientras que las células HepaFH3 en confluencia podrían servir como sustitutos de PHP para estudios de metabolismo energético.