El epitelio intestinal es conocido por su rápida autorrenovación, y la glutamina es crucial para proporcionar carbono y nitrógeno para la biosíntesis. Sin embargo, la comprensión de cómo la glutamina afecta la expresión génica en el epitelio intestinal es limitada, y la identificación de los genes y señales esenciales involucrados en la regulación del crecimiento de las células epiteliales intestinales es particularmente desafiante. En este estudio, la suplementación con glutamina mostró una aceleración robusta de la proliferación de células epiteliales intestinales y la expansión de células madre. La secuenciación de ARN indicó cambios transcriptómicos diversos entre los grupos de control y de suplementación con glutamina, identificando 925 genes sobreexpresados y 1152 genes subexpresados. Los genes sobreexpresados se enriquecieron en la vía KEGG del ciclo celular y en términos GO de iniciación de la replicación del ADN, regulación de la actividad de la fosfatidilinositol 3-quinasa, replicación del ADN, complejo de proteína de mantenimiento de minicromosomas y unión de ATP, mientras que los genes subexpresados se enriquecieron en la vía KEGG de la vía de señalización p53, la vía de señalización TNF y la vía de señalización JAK-STAT, así como en términos GO de respuesta inflamatoria y vía de señalización apoptótica intrínseca en respuesta al estrés del retículo endoplásmico. Además, el análisis GSEA reveló una sobreexpresión significativa del ciclo celular, la iniciación de la replicación del ADN, la actividad de la helicasa de ARN dependiente de ATP, y una subexpresión de la vía de señalización TNF. La red de asociación proteína-proteína de los genes intersecados destacó la importancia de los factores de licencia de replicación del ADN en la promoción del crecimiento epitelial intestinal en respuesta a la glutamina. Basándonos en estos hallazgos, proponemos que la glutamina puede sobreexpresar factores de licencia de replicación del ADN, lo que lleva a un aumento de la señalización PI3K/Akt y a la supresión de las vías TNF, JAK-STAT y p53. En consecuencia, este mecanismo resulta en la proliferación de células epiteliales intestinales porcinas y la expansión de células madre intestinales.