Las agroindustrias del brócoli generan una cantidad significativa de desechos, lo que conduce a problemas tanto ambientales como económicos. Estos subproductos suelen ser desechados, a pesar de ser una fuente valiosa de compuestos bioactivos, incluidos los glucosinolatos (GSL), que pueden modular mediadores oxidantes e inflamatorios, ejerciendo propiedades antiinflamatorias. Un desafío crucial en la explotación de los subproductos agroindustriales del brócoli es el desarrollo de tecnologías de extracción sostenibles y ecológicas. En este trabajo, se ha desarrollado y optimizado la extracción líquida presurizada (PLE) basada en la metodología de superficie de respuesta (RSM) para la extracción de GSL, con el objetivo de evaluar los posibles mecanismos protectores desencadenados por extractos enriquecidos en GSL de subproductos de brócoli en fibroblastos miofibrilares CCD-18Co expuestos a lipopolisacáridos (LPS). Los resultados obtenidos mostraron que la PLE es un procedimiento alternativo eficiente y ambientalmente sostenible para extraer GSL de subproductos de brócoli. Además, el extracto enriquecido en GSL obtenido a través de PLE exhibió propiedades antioxidantes y antiinflamatorias en células estimuladas con LPS, siendo capaz de atenuar la expresión de algunos marcadores proinflamatorios (IL-1beta, IL-6, IL-8 y TNF-alfa). Por lo tanto, estos compuestos podrían servir como agentes nutracéuticos potenciales para la prevención y mitigación de procesos oxidativos e inflamatorios relacionados con enfermedades intestinales, al mismo tiempo que promueven la valorización de estos subproductos.