El colangiocarcinoma (CCA) es un cáncer letal de conductos biliares, que tiene malos resultados en el tratamiento debido a su alta resistencia a la quimioterapia y la recurrencia del cáncer. Se ha informado que la activación de vías de señalización antiapoptóticas aberrantes es un mecanismo de quimiorresistencia y escape inmune del CCA. Por lo tanto, la reversión de la vía de señalización antiapoptótica representa un enfoque factible para potenciar tratamientos efectivos, especialmente para el CCA con alta quimiorresistencia. En este estudio, demostramos los efectos de la genisteína en la reactivación de la cascada de apoptosis y el aumento de la susceptibilidad de las células de CCA a las células asesinas naturales (NK-92). La genisteína a 50 y 100 uM activó significativamente la vía apoptótica extrínseca en células de CCA (KKU055, KKU100 y KKU213A), lo que fue evidente por la reducción de la expresión de procaspasa-8 y -3. El pretratamiento de las células de CCA con genisteína a 50 uM, pero no con células NK-92, aumentó significativamente la capacidad de muerte celular de NK-92 sobre el control no tratado, sugiriendo la capacidad de la genisteína para sensibilizar las células de CCA. Curiosamente, el tratamiento con genisteína podría reducir en gran medida la expresión de cFLIP, una proteína antiapoptótica involucrada en la vía de escape inmune, además de la regulación al alza de los receptores de muerte, receptores Fas y TRAIL, en las células de CCA, lo que podría ser el mecanismo molecular subyacente de la genisteína para sensibilizar el CCA y hacerlo susceptible a las células NK-92. En conjunto, este hallazgo reveló el beneficio de la genisteína como sensibilizador para mejorar la eficiencia de la inmunoterapia con células NK para el CCA.