Generación de cerdos en miniatura inmunodeficientes knockout para RAG2
Autores: Wang, Jing; Zhu, Feiyan; Jiao, Deling; Yang, Chang; Wang, Junqi; Wang, Fengchong; Zhao, Heng; Wei, Hong-Jiang; Zhao, Hong-Ye
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2024
Acceso abierto
Artículo científico
2024
Generación de cerdos en miniatura inmunodeficientes knockout para RAG2
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Zootecnia
Palabras clave
Genes de activación de recombinación
Sistema inmunológico
CRISPR/Cas9
Cerdos
órganos inmunes
Citometría de flujo
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 12
Citaciones: Sin citaciones
Los genes de activación de recombinación (RAGs) juegan un papel crucial en el proceso de recombinación V(D)J y en el desarrollo de células inmunitarias. El desarrollo del sistema inmunológico y sus mecanismos en los cerdos exhiben una mayor similitud con los de los humanos en comparación con otros animales, lo que convierte a los cerdos en una herramienta valiosa para la investigación biomédica. En este estudio, utilizamos la edición genética CRISPR/Cas9 y la tecnología de transferencia nuclear de células somáticas para generar cerdos knockout (KO) de RAG2. Además, evaluamos el impacto del KO de RAG2 en los órganos inmunitarios y el desarrollo de células inmunitarias a través de observaciones morfológicas, análisis de sangre y tecnología de citometría de flujo. Se utilizaron líneas celulares KO de RAG2 como donantes para la clonación. Los embriones reconstruidos fueron trasplantados en 4 cerdas sustitutas, y después de 116 días de gestación, 2 cerdas dieron a luz a 12 lechones vivos, todos los cuales fueron confirmados como KO de RAG2. Los tamaños del timo y el bazo de los cerdos KO de RAG2 eran significativamente más pequeños que los de los cerdos de tipo salvaje (WT). Los resultados de la tinción con hematoxilina-eosina revelaron que las estructuras de los tejidos del timo y el bazo de los cerdos KO de RAG2 estaban desorganizadas y carecían de las estructuras características, lo que indica que el KO de RAG2 conduce a displasia del timo y el bazo. El análisis hematológico demostró que el número total de glóbulos blancos y linfocitos en la circulación de los cerdos KO de RAG2 era significativamente menor, mientras que el número de eosinófilos era mayor. Los resultados de la citometría de flujo indicaron que las proporciones de linfocitos T y B maduros se redujeron significativamente en comparación con los cerdos WT. Estos hallazgos verificaron con éxito el fenotipo de inmunodeficiencia de los cerdos KO de RAG2. Este estudio puede proporcionar animales experimentales para el desarrollo de modelos tumorales y animales humanizados.
Descripción
Los genes de activación de recombinación (RAGs) juegan un papel crucial en el proceso de recombinación V(D)J y en el desarrollo de células inmunitarias. El desarrollo del sistema inmunológico y sus mecanismos en los cerdos exhiben una mayor similitud con los de los humanos en comparación con otros animales, lo que convierte a los cerdos en una herramienta valiosa para la investigación biomédica. En este estudio, utilizamos la edición genética CRISPR/Cas9 y la tecnología de transferencia nuclear de células somáticas para generar cerdos knockout (KO) de RAG2. Además, evaluamos el impacto del KO de RAG2 en los órganos inmunitarios y el desarrollo de células inmunitarias a través de observaciones morfológicas, análisis de sangre y tecnología de citometría de flujo. Se utilizaron líneas celulares KO de RAG2 como donantes para la clonación. Los embriones reconstruidos fueron trasplantados en 4 cerdas sustitutas, y después de 116 días de gestación, 2 cerdas dieron a luz a 12 lechones vivos, todos los cuales fueron confirmados como KO de RAG2. Los tamaños del timo y el bazo de los cerdos KO de RAG2 eran significativamente más pequeños que los de los cerdos de tipo salvaje (WT). Los resultados de la tinción con hematoxilina-eosina revelaron que las estructuras de los tejidos del timo y el bazo de los cerdos KO de RAG2 estaban desorganizadas y carecían de las estructuras características, lo que indica que el KO de RAG2 conduce a displasia del timo y el bazo. El análisis hematológico demostró que el número total de glóbulos blancos y linfocitos en la circulación de los cerdos KO de RAG2 era significativamente menor, mientras que el número de eosinófilos era mayor. Los resultados de la citometría de flujo indicaron que las proporciones de linfocitos T y B maduros se redujeron significativamente en comparación con los cerdos WT. Estos hallazgos verificaron con éxito el fenotipo de inmunodeficiencia de los cerdos KO de RAG2. Este estudio puede proporcionar animales experimentales para el desarrollo de modelos tumorales y animales humanizados.