La leptina (LEP), una hormona proteica bien conocida por su papel en la regulación metabólica, se ha relacionado recientemente con el metabolismo de lípidos en el ganado. Sin embargo, su función en las glándulas mamarias de búfalos sigue sin estar clara. Para abordar este problema, aislamos e identificamos el gen y realizamos experimentos para investigar su función en las células epiteliales mamarias de búfalos (BuMECs). En este estudio, se identificaron dos variantes de transcripción, designadas como _X1 y _X2. Las secuencias codificantes (CDS) de _X1 y _X2 tienen longitudes de 504 bp y 579 bp, codificando 167 y 192 residuos de aminoácidos, respectivamente. El análisis bioinformático reveló que LEP_X2 es una proteína hidrofóbica con un punto isoeléctrico por debajo de 7 y contiene un péptido señal, mientras que LEP_X1 es hidrofílica y carece de un péptido señal. Nuestro estudio encontró que la expresión génica en BuMECs lactantes fue significativamente mayor que en células no lactantes, con una expresión de _X2 notablemente más alta que la de _X1 en BuMECs lactantes. La sobreexpresión de ambos _X1 y _X2 promovió significativamente la expresión de genes relacionados con la síntesis de grasa láctea en BuMECs lactantes, incluyendo , , , , y , acompañada de un aumento en los triglicéridos celulares (TG). Curiosamente, la sobreexpresión de _X2 suprimió significativamente la expresión de _X1 mientras aumentaba la concentración intracelular de TG en 12.10 veces en comparación con la sobreexpresión de _X1, sugiriendo una relación antagónica entre las dos variantes y suponiendo que _X2 juega un papel dominante en la síntesis de grasa láctea en BuMECs lactantes. Además, se identificaron cuatro sustituciones de nucleótidos en el CDS de búfalo, incluyendo una sustitución no sinónima c.148C>T (p.Arg50Cys), que se predijo que disminuiría la estabilidad de la proteína LEP sin afectar su función. Estos resultados subrayan colectivamente el papel significativo de en la síntesis de grasa láctea y pueden proporcionar una base para estrategias de cría molecular de búfalos.