Los fitosteroles son compuestos naturales que se encuentran en todas las plantas superiores y que tienen una amplia variedad de roles en la regulación del crecimiento de las plantas y la tolerancia al estrés. La composición de fitosteroles también puede influir en el desarrollo y la tasa reproductiva de insectos herbívoros estrictos y en otros rasgos agronómicos importantes, como la tolerancia a la temperatura y a la sequía en las plantas. En este estudio, analizamos la composición de fitosteroles en 18 cultivares de colza y 20 accesiones pertenecientes a 10 especies silvestres relacionadas de Brassicaceae para explorar perfiles de fitosteroles diversos y novedosos. Las plantas se cultivaron en un ambiente controlado de fitotrón y sus fitosteroles se analizaron utilizando un método de extracción por saponificación seguido de GC-MS a partir de muestras de hojas. Los cultivares mostraron una ligera diversidad en ocho fitosteroles (>0.02%) debido al efecto genotípico, mientras que las accesiones silvestres mostraron una variabilidad significativa en sus perfiles de fitosteroles. De interés, se encontraron varias accesiones silvestres con altos niveles de campesterol (HIN20, HIN23, HUN27, HIN30, SARS2 y UPM6563), estigmasterol (UPM6813, UPM6563, ALBA17 y ALBA2) e isofucosterol (SARS12, SAR6 y DMU2). Estos cambios en fitosteroles individuales, o en las proporciones de fitosteroles, pueden tener una implicación significativa en la tolerancia de las plantas al estrés abiótico y en las propiedades de resistencia de las plantas a los insectos, lo que puede ser utilizado en la mejora de cultivos.