L. es una planta aromática importante que se ha utilizado tradicionalmente en la medicina popular desde tiempos antiguos. Su creciente interés para la comunidad científica se atribuye principalmente a su perfil químico distintivo, que incluye compuestos bioactivos, como polifenoles (ácidos fenólicos y flavonoides) y compuestos volátiles (aceite esencial). Estos componentes contribuyen colectivamente al amplio espectro de actividades biológicas del orégano. En este estudio, se caracterizaron los componentes volátiles del aceite esencial (WEO_OR) y la fracción polifenólica del extracto metanólico (ME_OR) obtenidos de hojas e inflorescencias recolectadas en la naturaleza en el centro de Italia, utilizando GC-MS y UHPLC-DAD, respectivamente. Se identificó el carvacrol como el compuesto principal en el aceite esencial, mientras que el ácido rosmarínico fue predominante en el extracto metanólico. También se realizó un análisis comparativo con un aceite esencial disponible comercialmente (CEO_OR), con el objetivo de evaluar posibles diferencias en la composición química y la actividad antioxidante (ensayos DPPH, ABTS y FRAP). ME_OR mostró la actividad antioxidante más fuerte (DPPH IC = 0.052 mg mL; ABTS = 3.94 mg TE mL; FRAP = 30.58 mg TE g), seguido por CEO_OR (DPPH IC = 0.45 mg mL; ABTS = 9.57 mg TE mL; FRAP = 7.33 mg TE g), mientras que WEO_OR mostró los valores más bajos (DPPH IC = 1.54 mg mL; ABTS = 0.10 mg TE mL). Además, ME_OR y WEO_OR se probaron in vitro utilizando la línea celular de hepatoblastoma humano HepG2 para evaluar sus posibles actividades biológicas relacionadas con la supervivencia celular y el estrés oxidativo. Los resultados indicaron que en las dosis probadas, ni el ME ni el EO mostraron toxicidad significativa, como lo evidencia la tasa de proliferación inalterada de las células HepG2. Sin embargo, el ME a bajas dosis (50 y 100 g mL) y el EO (0.005%), administrados como un pretratamiento, exhibieron un efecto protector contra el estrés oxidativo, como se infiere de la reducción en los niveles de 8-OHdG, un marcador de daño oxidativo a los ácidos nucleicos.