El desarrollo de modelos de músculo esquelético robustos ha sido un desafío debido a la recapturación parcial de la fisiología y arquitectura humanas. Modelos de músculo esquelético 3D confiables e innovadores recientemente descritos ofrecen una alternativa que captura de manera más precisa el entorno in vivo, pero requieren una fuente celular abundante. La reprogramación directa o la transdiferenciación se han considerado como una alternativa. Informes recientes han proporcionado evidencia de mejoras significativas en la eficiencia de la derivación de miotubos esqueléticos humanos a partir de fibroblastos humanos. En este trabajo, nuestro objetivo fue mejorar el proceso de transdiferenciación de fibroblastos humanos (tHFs), además de la diferenciación de mioblastos esqueléticos murinos (C2C12) y la diferenciación de mioblastos esqueléticos humanos primarios (HSkM). Las células en diferenciación o transdiferenciación fueron expuestas a ligandos biológicos individuales o combinaciones de ellos, incluyendo Follistatina, GDF8, FGF2, GDF11, GDF15, hGH, TMSB4X, BMP4, BMP7, IL6 y TNF-alfa. Estos fueron seleccionados por sus roles críticos en la miogénesis y regeneración. C2C12 y tHFs mostraron déficits significativos de diferenciación cuando se expusieron a FGF2, BMP4, BMP7 y TNF-alfa, mientras que la proliferación se vio significativamente aumentada por FGF2. Al exponer a combinaciones de ligandos, observamos un déficit de diferenciación consistente cuando se incluyó TNF-alfa. Finalmente, nuestra técnica de reprogramación directa permitió el ensamblaje de tHFs alargados, estriados y alineados dentro de construcciones de músculo esquelético 3D ingenierizadas. En conclusión, describimos un sistema eficiente para transdiferenciar fibroblastos humanos en células miogénicas y una plataforma para la generación de construcciones ingenierizadas de tejidos. Las direcciones futuras implicarán la evaluación de las características funcionales de estos tejidos ingenierizados.